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血小板数量与多种肿瘤类型的生长和侵袭性相关,包括肝细胞癌 (HCC)。我们之前发现血小板裂解物 (hPL) 还刺激生长和迁移,并拮抗索拉非尼和拜万戈/瑞戈非尼这两种多激酶抑制剂对三种 HCC 细胞系的生长抑制和凋亡作用。在这项研究中,研究了使用和不使用索拉非尼或瑞戈非尼时人表皮生长因子 (EGF) 的体外功能。

方法

ELISA 试剂盒用于评估 hPL 中的 EGF 浓度。EGF的体外功能通过增殖MTT测试进行评估。分别对细胞凋亡、侵袭和迁移进行细胞凋亡测定、划痕测定和 Transwell 测定。MAPK Activation Kit 用于探索 MAPK 磷酸化。

结果

EGF 拮抗拜万戈/瑞戈非尼对三种 HCC 细胞系的生长抑制作用。当细胞用 EGF 预处理时,瑞戈非尼介导的生长抑制被阻断了 70%。EGF 还阻断了瑞戈非尼诱导的细胞凋亡,以及瑞戈非尼诱导的细胞迁移和侵袭减少。EGF 作用反过来又被同时添加到 EGF 受体拮抗剂厄洛替尼的培养物中所拮抗,表明 EGF 受体参与了 EGF 介导的瑞戈非尼作用阻断机制。厄洛替尼还部分阻断了 hPLs 在拮抗瑞戈非尼介导的生长抑制中的作用,表明 EGF 是 hPL 作用的重要组成部分。

结论

所有这些结果表明,EGF 拮抗了拜万戈/瑞戈非尼介导的 HCC 细胞生长和迁移抑制以及凋亡诱导,并强化了微环境可以影响抗癌药物作用的观点。

我们之前表明,hPL 在体外刺激几种人 HCC 细胞系的生长,并诱导参与细胞增殖的几种激酶的水平,如 ERK、Akt、JNK 及其靶标 p38 和 STAT3,以及抑制细胞凋亡过程。我们还观察到 hPL 可以拮抗瑞戈非尼和索拉非尼、多激酶抑制剂以及多柔比星(一种常用的 HCC 化学疗法)对几种人类 HCC 细胞系的生长抑制作用。我们的初步数据还表明,EGF 和 IGF-I 能够在增殖试验中拮抗索拉非尼,并且几项研究提供的证据表明,EGF 在癌症炎症的发展中起初步作用,促进增强的转移潜能。在 HCC 中,EGF 通路与肝硬化进展至死亡有关,并且还在肝细胞转化中起作用。然而,瑞戈非尼是索拉非尼的一种近似类似物,目前用于临床试验以评估该药物在 HCC 患者中的安全性和有效性(最近 FDA 批准用于治疗结直肠癌)。影响信号通路的分子与参与瑞戈非尼作用的分子相互交谈,有可能用于联合治疗。当前工作中的观察结果表明,在 HCC 治疗中,同时控制参与瑞戈非尼和 EGF 活性的分子途径的重要性。

我们发现 EGF 以与在 hPL 中测量的相同浓度使用,显着拮抗瑞戈非尼在 Hep3B、PLC/PRF/5 和 HepG2 人 HCC 细胞中的生长抑制作用。这种作用被 HER1/EGFR 自身磷酸化的强效抑制剂厄洛替尼阻断。厄洛替尼以不影响增殖的无毒浓度使用。厄洛替尼的抑制作用可能是 EGFR 特异性的,因为其他生长因子抑制剂,如 GSK1838705A,已知可抑制 IGF-1 受体,不会抵消 EGF 的作用。

我们还观察到拜万戈/瑞戈非尼预处理可以改变 EGF 的刺激作用。瑞戈非尼介导的细胞生长抑制仅被 EGF 后处理部分挽救,表明瑞戈非尼处理即使是可逆的,也会改变细胞。然而,EGF 预处理保护细胞免受瑞戈非尼介导的生长抑制,减少了 40%,这表明 EGF 信号传导与观察到的瑞戈非尼耐药性有关,或者瑞戈非尼介导的生长控制的主要机制是通过干扰EGF 途径,然后通过添加 EGF 来抵消。一个推论是 EGFR 抑制剂可能会增强瑞戈非尼的生长抑制作用。我们关于细胞周期进程的结果支持 EGF 对瑞戈非尼介导的生长抑制产生拮抗作用的想法。厄洛替尼逆转了 EGF 的作用,表明对瑞戈非尼生长抑制的拮抗作用是通过 EGFR 发挥的。EGF 对瑞戈非尼作用的拮抗作用表现为药物介导的细胞凋亡。

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发表时间:2022-08-12 

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